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Etude des effets de l’acide docosahexaénoïque (DHA) sur la fibrose post-opératoire des bulles de trabéculectomie dans la chirurgie du glaucome

La trabéculectomie reste le traitement chirurgical de référence en cas de glaucome réfractaire. Le pronostic de cette chirurgie est conditionné par le développement d’une bulle de filtration pérenne mais peut être compromis par une fibrose post-opératoire excessive. Les anti-métabolites tels que la Mitomycine C (MMC) exposent à de nombreux effets secondaires. Des études antérieures reconnaissent les effets anti-inflammatoire, anti prolifératif et anti-angiogénique d’un acide gras oméga-3, l’acide docosahexaénoïque (DHA). L’objectif de cette étude est d’évaluer le potentiel effet antifibrotique du DHA, de comparer ses effets à la MMC et d’étudier les voies de signalisation cellulaire impliquées.

Les fibroblastes humains utilisés en culture primaire ont été isolés à partir de fragments chirurgicaux prélevés chez des patients opérés de glaucome au CHU de Dijon. Après stimulation en présence de TGF-β2 (1ng/ml), les fibroblastes de 3ème génération ont été exposés à la MMC (0.01ng/ml), et à 3 doses de DHA (50, 100 and 200 µM) pendant 48H. Les tests fonctionnels suivants ont été réalisés pour chaque condition : viabilité cellulaire par test du MTT, capacité de migration par vidéomicroscopie, capacité de prolifération par marquage immunohistochimique au KI67, analyse du cycle cellulaire par cytométrie en flux. Nous avons également confirmé l’incorporation cellulaire du DHA par chromatographie en phase gazeuse. La différenciation des fibroblastes en myofibroblastes a été évaluée par l’expression de α-SMA (α-smooth muscle actin) alors que l’identification des protéines Smad, et des MAPK impliquées dans les voies de signalisation cellulaire l’a été par Western blotting.

La Mitomycine C réduit significativement la migration des fibroblastes à partir de la 24ème heure comparé au groupe témoin (p<0.01). Nous observons une forte toxicité reflétée par l’augmentation de l’activité respiratoire mitochondriale des cellules et leur blocage en phase G2 par probable senescence. Nous n’avons pas observé d’impact significatif du DHA sur la viabilité cellulaire aux concentrations de 50 et 100 µM par rapport au témoin (Te) (94,95±11,43% et 90,35±21,38% vs Te =100±0.01%). Cependant à 200 µM, le DHA semble aussi toxique que la Mitomycine C. Dans les groupes DHA, une réduction de la migration cellulaire a été observée selon un effet dose-dépendant (p<0,05), ainsi qu’une diminution significative du niveau d’expression de α-SMA (p<0,05), suggérant ainsi une inhibition de la différenciation des fibroblastes. Les protéines Smad n’ont pas été mises en évidence.

Ces résultats suggèrent que le DHA inhibe la différenciation des fibroblastes en myofibroblastes. Cependant, à forte concentration, le DHA semble aussi toxique que la MMC.

Ces données constituent une piste intéressante afin d’expliquer l’effet antifibrotique du DHA sur les fibroblastes de la capsule de Tenon. Il sera impératif de compléter cette analyse par une étude cinétique de la viabilité cellulaire et de la prolifération afin de mieux comprendre et interpréter ces  données, et de tester une dose intermédiaire de DHA à 150µM. L’optimisation des conditions de l’analyse par western-blotting des protéines Smad sera également indispensable.